DNMT3B (rs2424913) polymorphism is associated with systemic lupus erythematosus alone and with co-existing periodontitis in a Brazilian population

Abstract The association between Periodontitis and Systemic Lupus Erythematosus (SLE) has been primarily based on their similar pathophysiology and both are associated with genetic polymorphisms. Objectives: To investigate an association between the methylation-related gene polymorphisms DNMT3B (rs2424913) and MTHFR (rs1801133) to Systemic Lupus Erythematosus (SLE) and Periodontitis. Methodology: In total, 196 individuals of all genders aged 24 to 60 years old were allocated into four groups based on their systemic and periodontal status, namely: Healthy control (n=60), periodontitis (n=51), SLE (n=47), and SLE + periodontitis (n=38). Individuals with SLE were stratified according to disease activity (SLEDAI) in inactive or active. We performed polymorphism analysis using PCR-RFLP with genomic DNA from mouthwash. We analyzed data using Fisher's Exact, Chi-square test, and regression models. Results: Periodontal status were similar in subjects with periodontitis alone and combined with SLE. SLE patients with periodontitis had a longer SLE diagnosis than SLE only (p=0.001). For DNMT3 B polymorphism, the periodontitis, SLE, and Inactive SLE + periodontitis groups showed a higher frequency of T allele and TT genotypes compared to healthy controls (p<0.05). Regression analyses showed that the TT genotype is a strong risk factor for periodontitis (OR=4.53; CI95%=1.13-18.05) and also for SLE without periodontitis (OR=11.57; CI95%=3.12-42.84) and SLE with periodontitis (OR=5.27; CI95%=1.25-22.11) when compared to control. Conclusion: SLE patients with periodontitis had a longer length of SLE diagnosis. The DNMT3B (rs2424913) polymorphism was associated with periodontitis and SLE alone or combined with periodontitis. Our study contributes to understanding the genetic mechanisms involved in periodontitis and SLE susceptibility.

Genetic polymorphisms of genes involved in oxidative stress and inflammatory management in oncopediatric patients with chemo-induced oral mucositis

Abstract Oral mucositis (OM) is a painful inflammatory oral condition that affects children who undergo chemotherapy. Oxidative stress is a known OM mediator and pro-inflammatory cytokines contribute to the amplification of the immune response. Objective: To investigate the possible associations of rs4880 (superoxide dismutase 2, SOD2 47 C/T), rs7943316 (catalase, CAT −21 A/T), rs1800629 (tumor necrosis factor α, TNF- α −308 G/A), and rs1800795 (interleukin 6, IL-6 −174 G/C) polymorphisms with chemo-induced OM occurrence and severity in oncopediatric patients. Methodology: We conducted a single-center, observational cross-sectional study with sample collection of oral epithelial cells from 95 children and adolescents with hematological cancers who underwent chemotherapy, followed by genomic DNA extraction. Single-nucleotide polymorphisms (SNPs) were assessed with PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism). Demographic data and information concerning OM occurrence were obtained from dental charts of the multidisciplinary oral care team. Information on OM severity was obtained from appropriately-filled Oral Assessment Guide records. Descriptive and inferential statistics were conducted with Student's T test, chi-squared test, and Fisher's exact test, with p≤0.05. Results: The mean age was 10 years-old and most patients were male individuals (57.89%). Female sex was considered a protective factor for OM occurrence (OR=4.83; CI=[1.14; 16.57]). The AA genotype for CAT was the most frequent amongst individuals with severe OM (p=0.04). The GA genotype for TNF- α was the most frequent amongst individuals without severe OM (p=0.03). For SOD2 and IL-6 , the most frequent genotypes were CT and GG respectively for all groups (p>0.05). Conclusion: The AA genotype for CAT −21 A/T was a tendency among the group with severe OM. Data on TNF- α −308 G/A were inconclusive. No associations were detected for SOD2 47 C/T and IL-6 −174 G/C polymorphisms in oncopediatric patients with chemo-induced oral mucositis.

ABCG2 polymorphism, age and leukocyte count may contribute to oral mucositis in oncopediatric patients

Abstract The study investigated the relationship between genetic polymorphisms and the development of oral mucositis in pediatric patients undergoing chemotherapy involving methotrexate. A longitudinal study was conducted with 64 patients, and oral mucositis was evaluated by the modified Oral Assessment Guide, which aims to diagnose and classify oral mucositis. Epithelial cells were obtained by mouthwash and DNA was extracted. The polymorphisms MTHFR (rs1801133), DNMT3B (rs2424913), ABCC2 (rs717620), ABCG2 (rs2231137) and ABCG2 (rs2231142) were analyzed by PCR-RFLP method. Demographic, hematological and biochemical data were collected from medical records. Statistical analysis was performed using the SPSS software adopting a p-value of 0.05. Male sex predominated (56.2%), and the mean age was 10.8 years (± 4.9). Oral mucositis affected 65.6% of the patients, of which 61.9% developed the severe form of the disease. For the ABCG2 gene (rs2231142), the rare A allele and CA genotype were more frequent in individuals with mucositis (p= 0.02; RR = 0.60; CI = 0.387 - 0.813). The severity of the disease was mainly observed in younger patients (median = 9 years; p=0.02). Patients with severe oral mucositis presented lower leukocytes count (median = 2.150 mm3) compared to patients with the mild/moderate form (median = 4.200 mm3; p=0.03). Female patients and each 10,000-platelet increase were protective factors against the onset of oral mucositis (p=0.02). It is concluded that rs2231142 polymorphism increases the likelihood of oral mucositis and younger patients and patients with low leukocytes counts are more likely to develop severe form.

Resumo O presente estudo investigou a relação entre cinco polimorfismos genéticos e o desenvolvimento de mucosite oral em pacientes pediátricos recebendo quimioterapia com metrotexato. O estudo longitudinal foi conduzido com 64 pacientes e a mucosite oral avaliada pelo Oral Assessment Guide modificado, que tem como objetivo diagnosticar e classificar a mucosite oral. Células epiteliais bucais foram obtidas por bochecho e o DNA foi extraído. Os polimorfismos MTHFR (rs1801133), DNMT3B (rs2424913), ABCC2 (rs717620), ABCG2 (rs2231137) e ABCG2 (rs2231142), foram analisados pela técnica de PCR-RFLP. Dados demográficos, hematológicos e bioquímicos foram coletados a partir de registros médicos. Análise estatística foi realizada utilizando o software SPSS adotando um valor de p=0,05. Observou-se que, o sexo masculino foi predominante (56,2%), e a idade média foi de 10,8 anos (± 4.9). A mucosite oral acometeu 65,6% dos pacientes, dos quais, 61,9% desenvolveram a forma grave da doença. Para o gene ABCG2 (rs2231142), o alelo raro A e o genótipo CA foram mais frequentes em indivíduos com mucosite (p= 0.02; RR = 0.60; CI = 0.387 - 0.813). A gravidade da doença foi observada principalmente em pacientes mais jovens (mediana = 9 anos; p=0.02). Além disso, os pacientes com mucosite oral grave apresentaram menor contagem de leucócitos (mediana = 2150 mm3) em comparação aos pacientes com a forma leve/moderada (mediana = 4200 mm3; p=0.03). Pacientes do sexo feminino e aumento a cada 10.000 plaquetas foram fatores de proteção contra o aparecimento de mucosite oral (p=0.02). Concluiu-se que a presença do polimorfismo rs2231142 aumenta o risco de o paciente desenvolver a mucosite oral, bem como pacientes mais jovens e menor contagem de leucócitos contribui com a severidade.

miR-9-1 gene methylation and DNMT3B (rs2424913) polymorphism may contribute to periodontitis

Abstract Genetic and epigenetic changes have been associated with periodontitis in various genes; however, little is known about genes involved in epigenetic mechanisms and in oxidative stress. Objective: This study aims to investigate the association of polymorphisms C677T in MTHFR (rs1801133) and −149C→T in DNMT3B (rs2424913), as well as the methylation profiles of MTHFR, miR-9-1, miR-9-3, SOD1, and CAT with periodontitis. The association between polymorphisms and DNA methylation profiles was also analyzed. Methodology: The population studied was composed of 100 nonsmokers of both sexes, divided into healthy and periodontitis groups. Genomic DNA was extracted from the epithelial buccal cells, which were collected through a mouthwash. Polymorphism analysis was performed through polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP), while methylation-specific PCR (MSP) or combined bisulfite restriction analysis techniques were applied for methylation analysis. Results: For DNMT3B, the T allele and the TT genotype were detected more frequently in the periodontitis group, as well as the methylated profile on the miR-9-1 promoter region. There was also a tendency towards promoter region methylation on the CAT sequence of individuals with periodontal disease. Conclusion: The polymorphism −149C→T in DNMT3B (rs2424913) and the methylated profile of the miR-9-1 promoter region are associated with periodontitis.

Voce ja comeu DNA hoje? Divulgacao cientifica durante a Semana da Ciencia e Tecnologia no Brasil / Have you eaten any DNA today? Science communication during Science and Technology Week in Brazil

Durante a Primeira Semana Nacional de Ciências e Tecnologia, em 2004, centros e museus de ciência, universidades e escolas implementaram atividades com o objetivo de divulgar ciência para a população. O DNA Vai à Escola se juntou ao Conselho de Informação e Biotecnologia e praticou a extração de DNA de frutas em supermercados de 11 cidades brasileiras. Este artigo descreve a formação da rede nacional de pessoas interessadas em transmitir informações sobre genética para o público leigo e a implementação de uma atividade de divulgação científica de baixo orçamento em vários pontos do país, simultaneamente. Apresenta ainda o impacto causado pela atividade e as percepções daqueles envolvidos na sua organização.

During the first National Science and Technology Week held in 2004, science centers and museums, universities and schools engaged in activities with the idea of divulging science to the people. Demonstrations of the extraction of DNA from fruits were conducted in supermarkets in 11 Brazilian cities by two institutions, DNA Vai à Escola and Conselho de Informação e Biotecnologia. This article describes the formation of a national network of people interested in communicating information about genetics to the lay public and the implementation of a low-cost science communication activity in different parts of the country simultaneously. It also analyzes the impact caused by this initiative and the perceptions of those involved in its organization.

Frequency of MTHFR G1793A polymorphism in individuals with early coronary artery disease: cross-sectional study / Frequencia do polimorfismo MTHFR G1793A em individuos portadores de doenca arteriocoronariana precoce: estudo transversal

CONTEXT AND OBJECTIVE: Atherosclerotic disease is the leading cause of death in Brazil. It is a complex disease and its prevention involves identification and control of risk factors. Moderately increased plasma homocysteine concentration (hyperhomocysteinemia) has been considered to be a risk factor for several vascular diseases. Mutations in the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) enzyme, which is involved in homocysteine metabolism, have been investigated as potential vascular disease risk factors. G1793A polymorphism was described in 2002 and there are few studies analyzing its involvement in diseases. The objective of this study was to investigate the prevalence of G1793A polymorphism in subjects with early coronary artery disease (CAD). DESIGN AND SETTING: Cross-sectional study with control group conducted at a private cardiology clinic and a molecular biology laboratory (Universidade do Vale do Itajaí). METHODS: We studied 74 early-onset CAD+ patients and 40 CAD- individuals with normal angiography results. DNA was extracted from blood samples. Molecular data were obtained via PCR/RFLP and agarose gel electrophoresis. RESULTS: The occurrence of G1793A heterozygotes was similar in the control (5%) and test (6.25%) groups, thus showing that in the population studied there was no correlation between the marker and occurrences of early CAD. There was also no association between the polymorphism and the risk factors for atherosclerosis. CONCLUSIONS: The frequency of the 1793A allele in the test group (3.4%) was similar to what was found in the control individuals (2.5%). There was no correlation between G1793A polymorphism and occurrences of early CAD in this population. .

CONTEXTO E OBJETIVO: A doença aterosclerótica é a principal causa de morte no Brasil. Trata-se de doença multifatorial e sua prevenção passa pela identificação e controle dos fatores de risco. A concentração plasmática moderadamente aumentada de homocisteína (hiperhomocisteinemia) tem sido considerada importante fator de risco para várias doenças vasculares. Mutações na enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), envolvida no metabolismo de homocisteína, têm sido investigadas como fatores de risco para doenças vasculares. O polimorfismo G1793A foi descrito em 2002 e existem poucos estudos sobre sua implicação em doenças. O objetivo do presente trabalho foi verificar a prevalência do polimorfismo MTHFR G1793A em indivíduos portadores de doença arteriocoronariana (DAC) precoce. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal com grupo controle realizado em Clínica Cardiológica Particular e Laboratório de Biologia Molecular (Universidade do Vale do Itajaí). MÉTODOS: Foram estudados 74 pacientes DAC+ precoce e 40 DAC- com resultado angiográfico normal. O DNA foi extraído de amostras de sangue. Dados moleculares foram obtidos através de PCR/RFLP e eletroforese em gel de agarose. RESULTADOS: A ocorrência de heterozigotos G1793A foi similar em ambos os grupos controle (5%) e teste (6,25%), mostrando que na população estudada não existiu correlação entre o marcador e a ocorrência de DAC precoce. Não houve associação entre o polimorfismo e os fatores de risco para aterosclerose. CONCLUSÕES: A frequência do alelo 1793A no grupo teste (3,4%) foi parecida com a encontrada nos indivíduos do controle (2,5%). Não houve correlação entre o polimorfismo G1793A e a ocorrência de DAC precoce ...

Determinação sérica de lipídeos: variações interlaboratoriais / Determination serica of lipids: variations interlaboratoriais

A aterosclerose encontra-se em primeiro lugar dentre as várias causas de morte no mundo ocidental; distribuída em todo mundo, ela vem alcançando proporções epidêmicas alarmantes. A determinação laboratorial das concentrações de triglicerídeos,colesterol total (CT), HDL-colesterol (HDL-C) e LDL-colesterol (LDL-C) é pré-requisito importante na avaliação do risco que um indivíduo apresenta de desenvolver doenças relacionadas à aterosclerose. O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade interlaboratorial na determinação destes analitos. Para isso, foram enviados aos laboratórios de análise clínicas (LACs) participantes do estudo 10 amostras de soro de origem humana, para determinação de triglicerídeos, CT, HDL-C e LDL-C. A metodologia foi planejada a fim de eliminar variáveis pré-analíticas, permitindo assim quantificar a variação da mesma determinação entre os LACs participantes. Adeterminação de CT foi a que apresentou a menor dispersão de resultados, sendo este dado evidenciado pela inexpressiva quantidade de valores fora da linha de ± 2SD. A análise de dispersão de HDL-C mostrou que 50 dos indivíduos analisados receberia resultados com interpretações clínicas diferentes por diferentes LACs. Esta porcentagem foi de 40 no LDL-C e de 40 para triglicerídeos. Os resultados obtidos permitem concluir que a variabilidade laboratorial na determinação de lipídeos pode ser um fator importante na interpretação de resultados seqüenciais.

Variabilidade biológica na concentração de lipídeos séricos em idosos / Biological variability in concentration of serum lipids in elderly

As doenças cardiovasculares são uma das principais causas de mortalidade no mundo. O perfil lipídico caracterizado por dosagens de colesterol total, triglicerídeos, HLL colesterol e cálculo do LDL colesterol é o principal instrumento na avaliação de doenças cardiovasculares. Diante de um resultado laboratorial é necessário considerar que existem muitas variáveis que contribuem para as flutuações de resultados sem justificativa clínica aparente. Estes fatores podem ser analíticos, pré analíticos ou biológicos, chamado de variabilidade biológica. az-se necessário quantificar a porcentagem de variação biológica presente nos resultados de uma determinada dosagem laboratorial. A proposta deste trabalho foi avaliar a variabilidade biológica da determinação de lipídeos séricos em idosos. Foram avaliados o perfil lipídico sérico de 16 pacientes idosos, sendo 8 homens e e 8 mulheres, durante o período de 4 semanas, tendo um total de 8 coletas; no município de Luis Alves - SC. A variabilidade biológica na determinação de todos os analitos lipídicos avaliados neste trabalho foi menor que as encontradas em indivíduos jovens. Não houve diferença entre as variabilidades médias de homens e mulheres. O grupo que utilizava medicamentos de uso contínuo apresentou variabilidades biológicas médias menores que o grupo de pacientes que não fazia uso de nenhum medicamento. Portanto, o uso de medicamentos não afeta de forma a incrementar a variabilidade biológica na determinação de lipídeos séricos.

Análise molecular de estirpes de Escherichia coli isoladas a partir de amostras de urina de pacientes ambulatoriais por RFLP da região intergência 16s-23s' / Molecular analysis based on intergenic 16s-23s RFLP of Escherichia coli strains obtained from urine samples of ambulatorial pacients

A análise de RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) da região intergênica 16S-23S rDNA tem sido utilizada na diferenciação de estirpes de vários microrganismos. A digestão do produto de amplificação da região intergênica em isolados uropatogênicosde Escherichia coli com a enzima RsaI gerou dois padrões distintos, separando as estirpes em dois grupos: alfa e beta. Este trabalho teve como objetivo enquadrar dentro destes grupos 60 estirpes de E. coli isoladas a partir de urina de pacientes ambulatoriais no Laboratório Médico Santa Luzia (Florianópolis). Os produtos de amplificação foram digeridos com a enzima RsaI. Os fragmentos resultantes foram submetidos a análise eletroforética em gel de agarose 2% e as estirpes com padrões de restrição condizentes foram agrupadas. Através destas análises foi possível estabelecer correlações entre o perfil molecular e outros dados de análise bioquímicae de resistência a antibióticos.

RFLP analysis of 16S-23S rDNA intergenic region have been used in differentiation of many microorganisms strains. The digestion of the product of intergenic region amplification in uropathogenic strains of Escherichia coli with RsaI generated two distintpatterns: alpha and beta. This project had the aim of classify 60 Escherichia coli strains obtained from ambulatorial patients urine of the Laboratório Médico Santa Luzia (Florianópolis). The amplification products were digested with RsaI enzyme. The fragments weresubmitted to eletrophoretic analysis in 2% agarosis gel. Strains with the same restriction pattern were identified. This analysis allowed the correlation between molecular profile and biochemical and antibiotical resistence data.

Análise de fatores de risco clínico-laboratoriais para aterosclerose em idosos segundo escore de Framingham / Clinical and laboratorial analysis for risk factors for atherosclerosis in elderly population according to the Framingham score

A aterosclerose contribui significativamente para a taxa de mortalidade e morbidade no mundo ocidental. Os fatores de risco que predispõem à aterosclerose e consequente cardiopatia isquêmica foram identificados por vários estudos prospectivos em grupos definidos da população, mais especificamente o estudo Framingham Heart Study. Objetivos: Avaliar os fatores de risco clínicos e laboratoriais que acometem pacientes idosos e realizar análise associativa dos fatores de risco que acometeram esta população através dos cores de Framingham e a classificação dos indivíduos em baíxo, médio e alto risco para doença arterial coronariana. Material e Métodos: O presente estudo se desenvolveu no Asilo Dom Bosco de Itajaí (SC). A coleta de dados foi realizada na forma de anamnse clínica e anãlise clínica laboratorial para avaliação da glicemia, níveis de colesterol toral e HDL- colesterol. Foram analisados 51 idosos, sendo 19 homens e 32 mulheres com uma média de idade de 83,9 anos. Resultados: Os fatores de risco mais prevalentes observados foram hipertensão arterial sistêmica (HAS) e níveis alterados de colesterol total em ambos os sexos. Mais da metade dos homens, 52% apresentaram alto risco, 37% médio e 11% baixo risco, enquanto nas mulheres os valores encontrados foram 72% baixo e 28% médio risco, não sendo observado alto risco. Conclusão: Apesar da idade avançada ser um fator de risco não modificável, pode-se diminuir o risco cardíaco na população idosa através do controle dos demais fatores, como HAS e colesterol total, que neste estudo, foram determinantes na estratificação de risco da população avaliada.

Prevalência do polimorfismo G1793A da metilenotetra-hidrofolato redutase em idosos - Itajaí, (SC) / Prevalence of mthfr G 1793A polimorfism in elderly - Itajaí, (SC)

Mutações no gene da enzima 5,10-metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), envolvida no metabolismo da homocisteína vêm sendo associadas à hiperhomocisteinemia e possivelmente como fator de risco para doenças vasculares. O objetivo do presente trabalho foi determinar o genótipo do polimorfismo G1793A da enzima MTHFR em 55 idosos internos no Asilo Dom Bosco (Itajaí/SC). Foram coletados 5,0 mL de sangue periférico, após jejum de 8 horas para a extração do DNA. A presença da mutação G1793A da MTHFR foi determinada através da amplificação de um fragmento do gene da enzima pela Reação em Cadeia da polimerase (PCR). A digestão do fragmento obtido com a enzima BsbrI, resultou em perfil de restrição que permitiu definir o genótipo dos pacientes. A análise molecular revelou que 2 pacientes (3,64) por cento apresentaram genótipo heterozigoto (GA); enquanto que os 53 restantes (96,36)

Otimização da detecção do polimorfismo Ala 677 - Val do gene que codifica a metilenotetrahidrofolato resutase (MTHFR) / Optimization of methylenetetrahydrofolate reductase C677T polimosphism detection

A mutação (C677T)no gene que codifica a enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) tem sido associada à hiperhomocisteínemia e, possivelmnte, ao risco elevado para doenças vasculares. O objetivo deste trabalho foi otimizar sua detecção por PCR para facilitar estudos populacionais. Foram testadas metodologias alternativas de purificação de DNA genômico humano e os resultados obtidos permitiram padronizar uma técnica com redução de reagentes para extração do DNA por precipitação com NaCl. Foram realizdos experimentos variando a concentração dos componentes da reação de PCR que permitiram definir que reações contendo metado do volume inicial de deoxinucleotídeos e iniciadores (primers), assim como 0,5U de Taq DNA polimerase produzem essencialmente a mesma quantidade de amplificado que a reação anteriormente utilizada. Testou-se ainda, a redução do volume da reação de PCR com objetivo de utilizar o produto de amplificação diretamente para digestão com a enzima HinfI, evitando assim, etapas de pipetagem que acarrtam em risco de contaminação. Obteve-se sucesso com 15mL de volume final, o que permitiu a utilização do sistema de PCR completo para digestão do produto amplificado. A importância deste estudo pode ser justificada pela significância que as doenças vasculares apresentam em termos populacionais e por este polimorfismo estar potencialmente relacionado com o risco de DAC (doença artério-coronariana) precoce.